ELISA(酶联免疫吸附测定)试验中吸光值均偏高的情况可能由多个因素引起。以下是几个常见原因及其相应的解决办法:
1. 室温太高:
原因:温超过建议的工作温度会加速反应速率,可能会导致非特异性结合增加,从而引起吸光值偏高。
解决办法:尝试降低实验室内的温度;尽量保持实验室温度稳定。如果无法降低室温,可以适当缩短温育时间。。
2.酶标记物污染了盒内其他试剂
原因:底物溶液可能被空气中的氧气或其他污染物氧化,从而提前产生颜色反应。
解决办法: 确保所有试剂分开保存,并避免交叉污染。若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。
3.反应时间过长
原因:过长的反应时间会导致底物过度氧化,造成吸光值偏高。
解决办法:严格按照实验方案控制反应时间。
4.酶标记物污染了盒内其他试剂
原因:酶标记物如果与其他试剂交叉污染,可能会导致非特异性的显色反应。。
解决办法:确保所有试剂分开保存,并避免交叉污染。 使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。
5. 洗涤不充分:
原因:不充分的洗涤步骤会留下多余的未结合物质,增加背景信号。
解决办法:确保按照说明书中推荐的方法进行彻底的洗涤。
6. 试剂过期或储存不当
原因:使用过期或未正确储存的试剂可能会影响其性能。
解决办法:检查所有试剂的有效期,并确认其存储条件符合要求。
7. 仪器校准问题: -
原因:酶标仪等读数设备如果没有定期校准,可能会导致读数不准确。
解决办法:定期对仪器进行校准和维护;确保其处于良好的工作状态。
8. 样品和试剂混合不均匀:
原因:不均匀的混合时常会导致反应条件不一致。
解决办法:确保每次加入样品和试剂时都充分混匀。