ELISA检测试剂盒保存和使用要点

1. 固相夹心法：

   • 进口ELISA试剂盒采用固相夹心法，即已知浓度的标准品和未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
   • 先将生物素标记的抗体同时温育，然后洗涤去除未结合的抗体。

2. 亲和素标记的HRP：

   • 加入亲和素标记的HRP，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物。

3. 底物反应：

   • 加入底物A和B，与酶结合物同时作用，产生颜色变化。
   • 颜色的深浅与样品中的待测物质浓度呈比例关系。

详细解释

1. 温度平衡：

   • 室温平衡：从冷藏环境中取出的试剂盒需要在室温下平衡15-30分钟，以确保试剂的温度一致，避免因温度差异导致的实验误差。
   • 密封保存：未用完的酶标包被板应装入密封袋中，防止空气中的湿气和污染物进入，影响后续实验结果。

2. 结晶处理：

   • 结晶析出：浓洗液中的某些成分可能会在低温下结晶，这在稀释时可以通过水浴加热溶解，不会影响清洗效果。

3. 加样操作：

   • 加样器：使用加样器可以确保每次加样的准确性和一致性，减少人为误差。
   • 加样时间：一次加样时间应控制在4分钟内，以保证所有样本在同一时间内完成加样，避免时间差异带来的误差。
   • 排枪加样：对于大量样本，使用排枪可以提高效率和准确性。

4. 标准曲线和复孔：

   • 标准曲线：每次测定应同时制作标准曲线，以确保结果的准确性和可比性。
   • 复孔：做复孔可以减少偶然误差，提高结果的可靠性。
   • 稀释：如果样本中待测物质含量过高，应先稀释后再测定，计算时需考虑稀释倍数。

5. 封板膜：

   • 一次性使用：封板膜只能一次性使用，避免交叉污染，确保每个实验的独立性和准确性。