采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被(PMG)抗体的包被微孔中，依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中PMG)呈正相关。用酶标仪在450m波长
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品：
仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 μL、20μL、200 μL、1000 μL)。
耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸酯(DEPC)水处理的离心管、吸头(10 μL、200 μL、1000 μL)、双蒸水。
操作注意事项：

1. 样品收集：- 血液样本：全血样本通常使用EDTA抗凝剂收集，避免使用肝素，因为肝素可能干扰PTS的测定。然后立即离心以分离血清或血浆。使用3000 g的转速离心10-15分钟。
- 细胞或组织样本：可以收集组织样本进行细胞抽提，提取蛋白质，然后进行PTS的测定。
2. 样品处理：- 血清/血浆：将分离的血清或血浆转移至无菌管中，避免光照和高温，因为这些因素可能影响PTS的活性或稳定性。
- 组织/细胞样本：使用适当的裂解缓冲液裂解细胞或组织，然后离心去除不溶性成分。
3. 保存：- 短期保存：样品可以在4°C冷藏，但尽快进行分析。
- 长期保存：-80°C冷冻可以长期保存样本。避免反复冻融以减少样本损失。
4. **标准化**：确保所有样本在相同条件下收集和处理，以提高结果的可比性。
5. **样品稀释**：根据ELISA试剂盒的说明，可能需要对样本进行适当的稀释，以使PTS的浓度在检测范围内。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法：
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1mi后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔，37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1in,甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内，在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线：在Ec工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应0D值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能：

1.抗体优势----、灵敏、特异
2.规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3.先进的优化方案----重复性高,可靠性强
4.购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5.技术服务要求:专业,规范,
6.适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7.可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8.可检测指标齐全:因子、生成素、因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9.经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,的科研队伍,先进的实验设备、准确可靠的实验结果
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。