品牌：卡凯希
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试剂配制:

1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。

2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。

3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5、辣根化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-idin Diluent):1×10ml/瓶。

6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7、辣根化物酶标记亲和素(HRP-idin):1×120μl/瓶(1:100)

8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

试剂准备:

1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。

2. 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成不同的梯度, 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

3. 浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。

优点:

安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2.灵敏度：最-低检测浓度小于1.0ng儿。
3.特：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月

1. - 收集样本，通常是血液样本，离心分离血清或血浆。
- 根据试剂盒说明，可能需要对样本进行稀释或特殊处理。
2. - 根据试剂盒提供的浓度梯度稀释标准溶液。
3. - 微孔板预先包被有特抗体，用于捕获1,25(OH)2D3。
4. - 在微孔板的孔中加载标准品、质控品和待测样本。
5. - 可能需要添加封闭剂以减少非特结合，然后在室温或37°C下孵育一段时间。
6. - 清洗微孔板以去除未结合的物质。
7. - 加入酶标记的抗体，该抗体能与1,25(OH)2D3结合。
8. - 让酶标记的抗体与1,25(OH)2D3结合。###
9. - 再次清洗微孔板以去除未结合的酶标记抗体。
10. - 加入底物溶液，底物在酶的作用下会变为可见的颜色。
11. - 允许颜色发展到稳定的程度，时间根据试剂盒说明确定。
12. - 加入终止液，停止颜色变化并稳定结果。
13. - 使用酶标仪在特定波长（通常450nm，有时405nm或630nm）下读取吸光度。
14. - 根据标准曲线计算样品中1,25(OH)2D3的浓度。

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