马α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa检测试剂盒
使用说明书
检测原理:
马α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被微囊藻毒素LR(MC-LR)抗体的包被微孔中,依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的微囊藻毒素LR(MC-LR)呈正相关。用酶标仪在450m波长
下测定吸光度(0D值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
4.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品:
*移液器和移液头**:用于量取液体,确保移液头与实验需求匹配。
**微量离心机**:用于样本的离心处理。
**恒温水浴或孵育器**:控制孵育温度,通常是37°C。
**洗板机**:用于清洗微孔板,减少非特结合。
**酶标仪**:测量吸光值,通常在450nm或其他波长。
**振荡器**:混合溶液,确保成分均匀。
**微量滴定管和量筒**:用于较大体积液体的转移。
**冷藏设备**:保持某些试剂在合适的低温环境中。
**实验室记事本和笔**:记录实验步骤和数据。
**防护装备**:实验服、手套、护目镜等,保护实验者安全。
**标准曲线绘制工具**:如Excel或其他数据分析软件,用于处理数据和绘制标准曲线。
**样本处理设备**:如离心机、匀浆器(视样本类型而定)。
**计时器**:确保每个步骤的时间准确。
在开始实验前,确保所有设备已校准,试剂新鲜且在有效期内,同时遵循实验室的安全规程。如果实验涉及生物样本,还需遵守生物安全规定
操作注意事项:
1. 样品收集:- 血液样本:全血样本通常使用EDTA抗凝剂收集,避免使用肝素,因为肝素可能干扰PTS的测定。然后立即离心以分离血清或血浆。使用3000 g的转速离心10-15分钟。
- 细胞或组织样本:可以收集组织样本进行细胞抽提,提取蛋白质,然后进行PTS的测定。
2. 样品处理:- 血清/血浆:将分离的血清或血浆转移至无菌管中,避免光照和高温,因为这些因素可能影响PTS的活性或稳定性。
- 组织/细胞样本:使用适当的裂解缓冲液裂解细胞或组织,然后离心去除不溶性成分。
3. 保存:- 短期保存:样品可以在4°C冷藏,但尽快进行分析。
- 长期保存:-80°C冷冻可以长期保存样本。避免反复冻融以减少样本损失。
4. **标准化**:确保所有样本在相同条件下收集和处理,以提高结果的可比性。
5. **样品稀释**:根据ELISA试剂盒的说明,可能需要对样本进行适当的稀释,以使PTS的浓度在检测范围内。
试剂的准备:
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法:
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1mi后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1in,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线:在Ec工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应0D值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能:
一、、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
**免责声明**
本ELISA试剂盒仅供科学研究使用,不适用于临床诊断或决策。用户在使用本产品时应具备相关的实验技能和知识,。在开始实验前,请仔细阅读并理解产品说明书和此免责声明。
相关产品推荐:
KKX-45613Z 植物玉米素(ZT)elisa试剂盒 Plant zeatin elisa Kit
KKX-58437M 小鼠26S蛋白酶体(26S PSM)elisa试剂盒 Mouse 26S proteasome elisa kit 26S PSM
KKX-46734Z 植物1,6-二磷酸果糖(FDP)elisa试剂盒 Plant 1,6 Fructose Diphosphate elisa Kit
KKX-56550M 小鼠β-联蛋白(β-Catenin)elisa试剂盒 Mouse β-Catenin elisa kit β-Catenin
KKX-46240Z 植物儿茶素(catechin)elisa试剂盒 Plant catechin elisa Kit
KKX-58723M 小鼠硫酸肝素糖蛋白(HSPG)elisa试剂盒 Mouse heparin sulphate protoglycans elisa kit HSPG
KKX-57942M 小鼠免疫球蛋白EFc段受体I(FcεRI)elisa试剂盒 Mouse FcεRI elisa kit FcεRI
KKX-57649M 小鼠 释放受体(GnRHR)elisa试剂盒 Mouse gonadotropin-releasing hormone Receptor elisa kit GnRHR
KKX-46465Z 植物木瓜蛋白酶(Papain)elisa试剂盒 Plant Papain elisa Kit
KKX-59451M 小鼠雷帕霉素靶蛋白C1(mTORC1)elisa试剂盒 Mouse mammalian target of rapamyein C1 elisa kit mTORC1
KKX-57026M 小鼠生存素(survivin)elisa试剂盒 Mouse survivin elisa kit survivin
KKX-46644Z 植物麦胚凝集素(WGA)elisa试剂盒 Plant Wheat germ agglutinin elisa Kit
KKX-56711M 小鼠甘氨酸(Gly)elisa试剂盒 Mouse Glycine elisa kit Gly
KKX-57476M 小鼠线粒体呼吸链复合物II(Complex II)elisa试剂盒 Mouse mitochondrial respiratory Complex II elisa kit Complex II
KKX-46441Z 植物对氧磷酶(PON)elisa试剂盒 Plant paraoxonase elisa Kit
KKX-46452Z 植物赤霉素20氧化酶(GA20ox)elisa试剂盒 Plant GA20oxidases elisa Kit
KKX-56870M 小鼠颗粒酶B(Gzms-B)elisa试剂盒 Mouse Gzms-B elisa kit Gzms-B
KKX-58963M 小鼠成纤维细胞生长因子1(FGF-1)elisa试剂盒 Mouse fibroblast growth factor 1 elisa kit FGF-1
KKX-58249M 小鼠Discs大同源物1(DLG1)elisa试剂盒 Mouse Large Homolog 1 elisa kit DLG1
KKX-56515M 小鼠Syndecan-1;CD138(SDC1;CD138)elisa试剂盒 Mouse Syndecan-1;Cd138 elisa kit SDC1;CD138