鸡IgY测定卵黄抗体elisa检测试剂盒
使用说明书
检测原理:
鸡IgY测定卵黄抗体elisa检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被微囊藻毒素LR(MC-LR)抗体的包被微孔中,依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的微囊藻毒素LR(MC-LR)呈正相关。用酶标仪在450m波长
下测定吸光度(0D值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
4.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品:
*移液器和移液头**:用于量取液体,确保移液头与实验需求匹配。
**微量离心机**:用于样本的离心处理。
**恒温水浴或孵育器**:控制孵育温度,通常是37°C。
**洗板机**:用于清洗微孔板,减少非特结合。
**酶标仪**:测量吸光值,通常在450nm或其他波长。
**振荡器**:混合溶液,确保成分均匀。
**微量滴定管和量筒**:用于较大体积液体的转移。
**冷藏设备**:保持某些试剂在合适的低温环境中。
**实验室记事本和笔**:记录实验步骤和数据。
**防护装备**:实验服、手套、护目镜等,保护实验者安全。
**标准曲线绘制工具**:如Excel或其他数据分析软件,用于处理数据和绘制标准曲线。
**样本处理设备**:如离心机、匀浆器(视样本类型而定)。
**计时器**:确保每个步骤的时间准确。
在开始实验前,确保所有设备已校准,试剂新鲜且在有效期内,同时遵循实验室的安全规程。如果实验涉及生物样本,还需遵守生物安全规定
操作注意事项:
1. 样品收集:- 血清:全血样本应该在抗凝剂(如EDTA)中收集,然后立即离心以分离血清。通常,使用3000 g的转速离心10-15分钟。
- 尿液:收集24小时尿液样本,以确保获得准确的CTX-1水平。避免收集晨尿,因为它可能含有更高的CTX-1浓度。
2. 样品处理: - 血清:收集后,将血清转移到无菌管中,避免接触金属表面,因为金属可能会降解CTX-1。
- 尿液:对于尿液,可以使用尿液稳定剂(如防腐剂)以防止细菌生长和蛋白降解。
3. 保存:- 短期保存:样品可以在4°C下冷藏1-2天。
- 长期保存:对于长期存储,-80°C是选择。避免反复冻融,因为这可能导致样本的损失或变性。
4. 标准化:所有样本应在相同条件下收集和处理,以确保结果的可比性。
5. 样品稀释:根据ELISA试剂盒的说明,可能需要对血清或尿液样本进行适当的稀释,以确保检测范围内的浓度。
6. 记录:在收集样本时,记录样本信息,包括患者ID、收集时间、样本类型等,以便后续数据分析。
7. 操作前准备:在进行ELISA之前,确保样本已经充分解冻并混合均匀,避免形成沉淀。
试剂的准备:
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法:
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1mi后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1in,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线:在Ec工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应0D值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能:
1.抗体优势----、灵敏、特异
2.规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3.先进的优化方案----重复性高,可靠性强
4.购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5.技术服务要求:专业,规范,
6.适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7.可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8.可检测指标齐全:因子、生成素、因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9.经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,的科研队伍,先进的实验设备、准确可靠的实验结果
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
**免责声明**
本ELISA试剂盒仅供科学研究使用,不适用于临床诊断或决策。用户在使用本产品时应具备相关的实验技能和知识,。在开始实验前,请仔细阅读并理解产品说明书和此免责声明。
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