(酶联免疫吸附测定)的基本使用方式可以概括为以下几个步骤:
1.样品准备:- 收集样本,如血液、组织、细胞培养上清液等。
- 按照试剂盒的指示处理样本,如离心、过滤、稀释或沉淀。
2. 标准曲线:- 准备标准品:按照试剂盒提供的浓度梯度稀释标准溶液。
- 在微孔板的多个孔中加载标准品,通常是双倍稀释系列。
3. 预包被: - 微孔板通常预先包被有特抗体,用于捕捉待测物质。
4. 样品加载:- 在微孔板的孔中加载样品和空白对照。
5. 封闭:- 可能需要添加封闭剂以减少非特结合。
6. 孵育:- 将微孔板在室温或37°C下孵育一段时间,让待测物质与包被抗体结合。
7. 洗涤:- 清洗微孔板以去除未结合的物质。
8. 添加酶标记的抗体:- 加入酶标记的抗体,它可以与步结合的抗原结合.
9. 再次孵育:- 让酶标记的抗体与抗原结合。
10. 洗涤:- 清洗微孔板以去除未结合的酶标记抗体。
11. 添加底物溶液:- 加入底物,底物在酶的作用下会发生颜色变化。
12. 孵育:- 允许颜色发展到稳定的程度,时间根据试剂盒说明确定。
13. 终止反应:- 加入终止液,停止颜色变化并稳定结果。
14. 读取吸光度:- 使用酶标仪在特定波长(通常450nm,有时405nm或630nm)下读取吸光度。
15. 数据分析:- 根据标准曲线计算样品中待测物质的浓度。
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