大鼠磷酸化细胞信号转导分子SMAD-3（P-SMAD3)elisa试剂盒检测原理：
大鼠磷酸化细胞信号转导分子SMAD-3（P-SMAD3)elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被微囊藻毒素LR(MC-LR)抗体的包被微孔中，依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的微囊藻毒素LR(MC-LR)呈正相关。用酶标仪在450m波长
下测定吸光度(0D值)，计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品：
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器

比色皿:用于比色的容器

96孔酶标板:用于比色的容器

分光光度仪:用于比色分析

酶标仪:用于微量样品比色分析
操作注意事项：

1. 样品收集：- 血清：全血样本应该在抗凝剂（如EDTA）中收集，然后立即离心以分离血清。通常，使用3000 g的转速离心10-15分钟。
- 尿液：收集24小时尿液样本，以确保获得准确的CTX-1水平。避免收集晨尿，因为它可能含有更高的CTX-1浓度。
2. 样品处理： - 血清：收集后，将血清转移到无菌管中，避免接触金属表面，因为金属可能会降解CTX-1。
- 尿液：对于尿液，可以使用尿液稳定剂（如防腐剂）以防止细菌生长和蛋白降解。
3. 保存：- 短期保存：样品可以在4°C下冷藏1-2天。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法：
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1mi后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔，37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1in,甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内，在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线：在Ec工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应0D值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能：
一、、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。